拟南芥低钙诱导cDNA文库的构建

北方农业学报 ›› 2016, Vol. 44 ›› Issue (5): 8-8.

拟南芥低钙诱导cDNA文库的构建

高天[1] 铁英[2] 王妍[1] 祁智[1]

[1]内蒙古大学生命科学学院,内蒙古呼和浩特010021 [2]内蒙古和盛生态科技研究院有限公司,内蒙古呼和浩特010021

出版日期:2016-10-20 发布日期:2016-10-20
通讯作者: 高天
作者简介:高天（1991-），男，在读硕士研究生，主要从事植物生理生化研究。通讯作者：祁智（1972-），男，教授，博士，主要从事植物生理生化研究。
基金资助:
国家自然科学基金项目（31171364）; 内蒙古自治区2015年博士研究生科研创新项目（B20151012604Z）

Construction of c DNA library induced by low Ca~（2＋）in Arabidopsis thaliana

GAO Tian1,TIE Ying2,WANG Yan1,QI Zhi1（1.College of Life Science, Inner Mongolia University, Hohhot 010021, China;2.Inner Mongolia Hesheng Ecological Science and Technology Research Institute Company Limited, Hohhot 010021, China）

Online:2016-10-20 Published:2016-10-20

摘要/Abstract

摘要： 钙是植物生长发育所必需的营养元素,Ca2＋作为细胞内信使参与多种信号途径。为了进一步研究Ca2＋在植物体内的调控机制,以生态型拟南芥为材料,提取了拟南芥经低钙诱导处理的幼苗总RNA,使用SMART c DNA合成技术合成含有与p GADT7-Rec载体末端同源的c DNA,然后将c DNA和p GADT7-Rec共转入酵母菌株Y187中,通过同源重组构建了拟南芥低钙诱导的c DNA文库。经检测,文库滴度为3×109 cfu/m L,文库插入片段在200~2 700 bp,平均插入片段大小为760 bp,阳性克隆率为79.2%。结果表明此c DNA文库质量良好,适用于互作蛋白的筛选。

Abstract: Calcium is an indispensable nutrient element for plant growth and development. The calcium ion（Ca2 ＋） is a versatile intracellular messenger that is involved in numerous signalling pathways. In order to explore the regulatory mechanism of calcium homeostasis in plants, we isolated total RNA from Arabidopsis thaliana seedlings induced with low Ca2＋. First, SMART c DNA synthesis technology was used to create a c DNA pool with end sequences homologous to the prey vector p GADT7-Rec. Then we co-transformed Y187 Yeast Strain and allowed the yeast to perform a recombination step between the linear prey vector and the c DNA. The c DNA library induced by low Ca2 ＋in Arabidopsis thaliana was thus constructed. The library capacity is about 3×10^9cfu/m L. The length of the insertion fragments ranges from 200 to 2 700 bp with an average length of 760 bp and the positive clone rate is 79.2%. These data suggest that the c DNA library is in high quality and suitable for screening the interacting proteins in Arabidopsis thaliana.

中图分类号:

Q943.2

高天铁英王妍祁智. 拟南芥低钙诱导cDNA文库的构建[J]. 北方农业学报, 2016, 44(5): 8-8.

[1]	韩平安, 孙瑞芬, 常悦, 唐宽刚, 王良, 聂利珍, 张自强, 梁亚晖, 吴新荣, 李晓东. CRISPR/Cas9技术介导烟草CENH3基因突变体的获得[J]. 北方农业学报, 2022, 50(3): 1-8.
[2]	聂可心, 李微, 李小龙, 郭嫒, 张靠稳, 王静. 蔗糖诱导拟南芥突变体rhd3合成花青素及基因表达分析[J]. 北方农业学报, 2020, 48(5): 55-61.
[3]	韩平安, 吴新荣, 孙瑞芬, 石海波, 薛春雷, 常悦, 唐宽刚, 梁亚晖, 任芹勇, 李晓东. 利用农杆菌介导法将抗草甘膦基因转入玉米自交系H99的研究[J]. 北方农业学报, 2020, 48(2): 21-26.
[4]	聂利珍, 房永雨. CRISPR/Cas9和CRISPR/Cpf1基因组编辑技术在农作物基因功能中的研究进展[J]. 北方农业学报, 2019, 47(4): 27-32.