畜牧与饲料科学 ›› 2010, Vol. 31 ›› Issue (6): 467-467.doi: 10.12160/j.issn.1672-5190.2010.06.157

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瘤胃总甲烷菌实时荧光定量PCR方法的构建

李长青[1] 金海[1] 栗原光规[2]   

  1. [1]内蒙古农牧业科学院生物技术中心,内蒙古呼和浩特010031 [2]日本国家农业生物资源研究所动物科学研究组,日本茨城305-0901
  • 出版日期:2010-06-20 发布日期:2010-06-20
  • 通讯作者: 李长青
  • 作者简介:作者简介:李长青(1978-),男,助理研究员,主要研究方向为动物营养及分子生物学。 通讯作者:金海(1962-),男,研究员,博士,博士生导师,主要研究方向为动物营养及分子生物学。
  • 基金资助:
    基金项目:中日合作项目“关于中国·亚洲东部区域反刍家畜生产状况利用及甲烷排放量的研究”

  • Online:2010-06-20 Published:2010-06-20

摘要: 试验构建了瘤胃总甲烷菌实时荧光绝对定量PCR的标准品及标准曲线用于总甲烷菌的定量测定,并提取瘤胃微生物总DNA,以甲烷菌特异性引物进行PCR扩增,回收纯化PCR产物,与pBS-T载体连接并转化到大肠杆菌,再用氨苄西林培养基筛选阳性重组质粒,提取含目的片段质粒DNA,通过PCR及测序鉴定重组质粒。根据OD值确定浓度,将梯度稀释的质粒作为模板,进行荧光定量PCR反应并作出标准曲线。结果表明:所构建的标准曲线具有很高的相关性(R2=0.992),并获得了高扩增效率产物。

中图分类号: