羊口疮病毒内蒙古株的分离与初步鉴定

doi:10.12160/j.issn.1672-5190.2022.02.020

畜牧与饲料科学 ›› 2022, Vol. 43 ›› Issue (2): 119-123.doi: 10.12160/j.issn.1672-5190.2022.02.020

羊口疮病毒内蒙古株的分离与初步鉴定

王娜¹, 戴伶俐¹, 乌云塔娜², 秀春³, 赵世华¹, 达来宝力格¹

1.内蒙古自治区农牧业科学院,内蒙古呼和浩特 010031;
2.呼伦贝尔市新巴尔虎右旗动物疫病预防控制中心,内蒙古新巴尔虎右旗 021300;
3.呼伦贝尔市新巴尔虎右旗农牧业事业发展中心,内蒙古新巴尔虎右旗 021300

收稿日期:2021-11-24 出版日期:2022-03-30 发布日期:2022-03-30
通讯作者: 达来宝力格（1979—）,男,助理研究员,博士,主要研究方向为牛羊疫病防控。
作者简介:王娜（1989—）,女,助理研究员,硕士,主要研究方向为动物传染病防控。
基金资助:
内蒙古农牧业创新基金项目（2013CXJJM11）。

Isolation and Preliminary Identification of Inner Mongolia Strains of Orf Virus

WANG Na¹, DAI Ling-li¹, Wuyuntana², Xiuchun³, ZHAO Shi-hua¹, Dalaibaolige¹

1. Inner Mongolia Academy of Agricultural and Animal Husbandry Sciences,Hohhot 010031,China;
2. Animal Disease Prevention and Control Center of New Barag Right Banner of Hulun Buir City,New Barag Right Banner 021300,China;
3. Agricultural and Animal Husbandry Affair Development Center of New Barag Right Banner of Hulun Buir City,New Barag Right Banner 021300,China

Received:2021-11-24 Online:2022-03-30 Published:2022-03-30

摘要/Abstract

摘要： [目的] 确定内蒙古地区规模化养殖场发生的疑似羊口疮的病原。[方法] 无菌采集疑似羊口疮病料7份,经剪碎、研磨、离心等处理后接种山羊皮肤成纤维细胞（goat skin fibroblasts,GSFs）培养;对分离到的病毒毒株进行电镜观察;利用B2L基因引物进行特异性PCR鉴定,对获得的B2L基因序列测序,构建系统发育树,并进行同源性分析。[结果] 3份病料经GSFs培养48 h后出现明显病变,分离的病毒经负染后在电镜下观察呈卵圆形,病毒粒子长220~250 nm,宽125~200 nm,符合羊口疮病毒（orf virus,ORFV）粒子的形态特征,并将其命名为NM-ORFV-1株、NM-ORFV-2株、NM-ORFV-3株。分离株经B2L基因PCR鉴定获得1 137 bp的扩增产物,与预期一致;系统发育树及同源性分析显示,NM-ORFV-2株与NM-ORFV-3株遗传关系密切,处于同一分支,且与ORFV KP336704（中国）分离株的亲缘关系最近,同源性达到99.4%;NM-ORFV-1株与NM-ORFV-2株及NM-ORFV-3株处于不同分支,NM-ORFV-1株与NM-ORFV-2株的同源性为99.1%,与NM-ORFV-3株的同源性为99.0%,且与ORFV JQ904789（中国）疫苗株亲缘关系最近,同源性为99.6%。[结论] 内蒙古地区规模化养殖场疑似羊口疮病例的病原是ORFV。

关键词: 羊口疮病毒, 分离, 鉴定

Abstract: [Objective] To determine the etiologic agent causing the suspected cases of contagious ecthyma （orf） in large-scale sheep farms in Inner Mongolia. [Method] A total of 7 clinical samples were aseptically collected from the diseased sheep with suspected orf symptoms, and they were subsequently inoculated with goat skin fibroblasts （GSFs） for virus isolation after cutting, grinding, and centrifugation. The obtained viral strains were morphologically observed by electron microscope. B2L gene primers were used for specific PCR identification, and the product was then sequenced. The phylogenetic tree based on B2L gene was constructed, and homology analysis was performed as well. [Result] There were 3 clinical samples with capacity to cause evident cytopathic alterations in GSFs after inoculation for 48 hours. Morphological observation with electron microscope demonstrated that the isolated virus was oval in shape, and the viral particles were 220-250 nm long and 125-200 nm wide, which were consistent with the morphological characteristics of orf virus （ORFV）. The 3 obtained ORFV strains were designated as NM-ORFV-1, NM-ORFV-2, and NM-ORFV-3, respectively. For each isolated viral strain, a product of 1 137 bp was amplified by PCR assay targeting B2L gene, which was consistent with the expecting size. Phylogenetic tree and homology analysis revealed that NM-ORFV-2 strain was closely genetically related to NM-ORFV-3 strain, and they clustered in the same branch; NM-ORFV-2 strain shared the highest homology （99.4%） with ORFV KP336704（China）wild strain; NM-ORFV-1 strain clustered in different branch from NM-ORFV-2 strain and NM-ORFV-3 strain, and the homologies of NM-ORFV-1 strain shared with NM-ORFV-2 strain and NM-ORFV-3 strain were 99.1% and 99.0%, respectively; NM-ORFV-1 strain shared the highest homology （99.6%） with ORFV JQ904789（China）vaccine strain. [Conclusion] ORFV is identified as the pathogenic agent that causes the suspected cases of orf in large-scale sheep farms in Inner Mongolia.

Key words: orf virus, isolation, identification

中图分类号:

S858.262.659.1

王娜, 戴伶俐, 乌云塔娜, 秀春, 赵世华, 达来宝力格. 羊口疮病毒内蒙古株的分离与初步鉴定[J]. 畜牧与饲料科学, 2022, 43(2): 119-123.

WANG Na, DAI Ling-li, Wuyuntana, Xiuchun, ZHAO Shi-hua, Dalaibaolige. Isolation and Preliminary Identification of Inner Mongolia Strains of Orf Virus[J]. Animal Husbandry and Feed Science, 2022, 43(2): 119-123.

参考文献

[1] GUO S P,SHI X T,SHI Z Y,et al.Identification and phylogenetic analysis of an orf virus isolated from an outbreak in Boer goat in Shanxi province[J]. Agricultural Sciences in China,2011,10(6):946-953.
[2] ZHAO K,SONG D G,HE W Q,et al.Identification and phylogenetic analysis of an orf virus isolated from an outbreak in sheep in the Jilin province of China[J]. Veterinary Microbiology,2010,142(3/4):408-415.
[3] 中华人民共和国农业农村部.农业农村部公告第1125号(一、二、三类动物疫病病种名录)[EB/OL]. (2008-12-22)[2021-11-15].http://www.moa.gov.cn/gk/tzgg_1/gg/201006/t20100606_1535636.htm.
[4] 于永忠,谭强,赵文博,等.羊口疮病毒黑龙江省分离株的分离鉴定[J].中国预防兽医学报,2013,35(8):678-680.
[5] 沙娜瓦尔·塔希,买买提艾力·斯迪克,比力克孜·阿不都热依木,等.新疆南疆地区羊口疮病毒的分离鉴定及其遗传进化分析[J].草食家畜,2018(1):26-32.
[6] 何建斌. 羊口疮病毒陕西株B2L基因的克隆表达及间接ELISA检测方法的建立[D].杨凌:西北农林科技大学,2017.
[7] 姚俊,彭海生,鲁富有,等.羊口疮病毒云南流行毒株的分子鉴定[J].上海畜牧兽医通讯,2012(3):2-5.
[8] 王秋霞,朱相儒,易成功,等.江苏省羊口疮病毒的分离鉴定及B2L基因的遗传进化分析[J].中国畜牧兽医,2017,44(4):950-958.
[9] 侯宏艳,惠文巧,张丹俊,等.安徽地区羊口疮病毒VIR基因PCR检测及遗传进化分析[J].中国草食动物科学,2017,37(1):4-6.
[10] 周铭,岳进华,刘鹤媛,等.陕西榆林某羊场羊口疮病毒的分离鉴定[J].动物医学进展,2016,37(9):31-34.
[11] 池雪林. 福建羊口疮病毒分离株的致病性和基因组学研究[D].福州:福建农林大学,2015.
[12] 张瑜. 羊口疮病毒杨凌株和泸西株的分离鉴定及毒力致弱研究[D].杨凌:西北农林科技大学,2014.
[13] 张海瑞. 羊口疮病毒的分离鉴定及其ELISA检测方法的建立[D].北京:中国农业科学院,2011.
[14] 向蓉,翟少伦,王晓虎,等.羊口疮病毒ORFV/GD-QY/01株的分离鉴定[J].广东农业科学,2018,45(9):116-120.
[15] 陈晓,李丽,葛雷,等.羊口疮病毒上海流行株的分离鉴定及其保护性抗原基因遗传进化分析[J].中国兽医学报,2018,38(4):655-661.
[16] 鲜思美,李鹏飞,李婷,等.羊口疮病毒感染MDBK细胞的电子显微镜观察[J].黑龙江畜牧兽医,2018(1):151-153,254.
[17] 苏高莉,赵魁,孙秀萍,等.羊口疮病毒农安分离株的分离鉴定及orf059(F1L)基因的序列分析[J].中国兽医学报,2013,33(1):4-8.
[18] 郭璐璐,崔言顺.羊口疮病毒广东大浦株的分离鉴定及其遗传进化分析[J].中国兽医杂志,2017,53(12):20-23,66.
[19] 常建军,陈曦,王天星,等.羊口疮病毒在羔羊4种原代细胞中的增殖特性研究[J].动物医学进展,2021,42(1):63-68.
[20] 王盈盈,贾怀杰,白刚,等.羊口疮病毒甘肃流行株的分离鉴定及其ORF059基因和ORF109基因的序列分析[J].中国兽医科学,2013,43(8):782-787.
[21] 李鹏飞. 羊口疮病毒DZ株分离、鉴定及在不同细胞系上的增殖特性研究[D].贵阳:贵州大学,2018.
[22] 杨海波. 新疆石河子地区羊传染性脓疱病毒的分离鉴定及其119基因缺失株研究[D].石河子:石河子大学,2014.

羊口疮病毒内蒙古株的分离与初步鉴定

Isolation and Preliminary Identification of Inner Mongolia Strains of Orf Virus

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[1]	邓朴明, 赵慧钢, 余复昌, 石团员, 孙洪超, 周炜, 周芷锦, 赵爱云, 齐萌. 杭州市规模化养殖场湖羊芽囊原虫的PCR检测与基因亚型鉴定[J]. 畜牧与饲料科学, 2024, 45(2): 103-108.
[2]	啜力文, 杨彬, 曹梦雅, 齐萌, 赫永强, 司俊飞, 井波, 张振杰. 柯坪县规模化养殖场双峰驼隐孢子虫感染情况调查与种类鉴定[J]. 畜牧与饲料科学, 2024, 45(2): 116-121.
[3]	陈俊凯, 于月通, 杨彬, 王泽坤, 李静, 陀海欣, 徐俊飞, 齐萌. 新疆维吾尔自治区阿拉尔市某规模化养殖场猪乳源金黄色葡萄球菌的分离鉴定及其毒力、耐药性分析[J]. 畜牧与饲料科学, 2024, 45(1): 114-119.
[4]	周云昊, 李小冬, 宋莉, 尚以顺, 刘凤丹, 裴成江, 李世歌, 刘军林. 金针菇菌糠纤维素降解菌的分离、生物学特性及酶活性分析[J]. 畜牧与饲料科学, 2023, 44(6): 31-40.
[5]	董贵, 于月通, 马志远, 王尧, 盛光玉, 陶大勇, 齐萌. 新疆维吾尔自治区和田地区规模化羊场腹泻羔羊源大肠杆菌的分离鉴定及毒力基因和耐药基因分析[J]. 畜牧与饲料科学, 2023, 44(6): 116-122.
[6]	冷静, 彭睿, 赖先军, 颜朗. 牧草叶面乳酸菌分离鉴定及青贮用优良乳酸菌的筛选[J]. 畜牧与饲料科学, 2023, 44(5): 48-56.
[7]	张博文, 司俊飞, 张振杰, 郭嘉栋, 陈荣, 赫永强, 余复昌, 齐萌. 新疆南疆某规模化绵羊养殖场腹泻羔羊隐孢子虫感染情况及其分子鉴定[J]. 畜牧与饲料科学, 2023, 44(5): 115-120.
[8]	石玉节,柴贝贝,张彦昕. 鸭源奇异变形杆菌和摩氏摩根菌的分离鉴定、NDM耐药基因检测及中药体外抑菌试验[J]. 畜牧与饲料科学, 2023, 44(5): 121-128.
[9]	郑伟, 康连和, 刘鹏斌, 特日格勒, 李子健, 李星云, 王莉梅, 张园园, 刘秀丽, 史培, 乔健敏. 内蒙古锡林郭勒盟酸乳清中酵母菌的分离鉴定[J]. 畜牧与饲料科学, 2023, 44(3): 103-108.
[10]	刘凯强, 俞进, 段真真, 金敏, 李佳, 巴音查汗·盖力克. 新疆阿克苏地区蜱和羊感染无浆体的分子流行病学调查[J]. 畜牧与饲料科学, 2023, 44(3): 122-128.
[11]	岳林芳, 成立新, 李蕴华, 苏少锋, 于朝晖, 王志铭, 吴海青. 常温和低温纤维素降解菌的筛选及其酶活特性[J]. 畜牧与饲料科学, 2023, 44(2): 9-16.
[12]	方晨, 王彦龙, 司俊飞, 蒋玉曦, 罗慧丽, 王云峰, 赵爱云, 齐萌. 新疆尉犁县某养殖场塔里木马鹿体表蜱和游离蜱的种类鉴定及分子遗传特征[J]. 畜牧与饲料科学, 2023, 44(1): 17-23.
[13]	熊菊萍, 肖滢宇, 张诚, 韩青松, 高小龙, 李增魁, 文英, 仝丽娜. 1株鸡源奇异变形杆菌的分离鉴定及药敏试验[J]. 畜牧与饲料科学, 2022, 43(5): 106-111.
[14]	宋越, 王娜, 张帆, 张月梅, 戴伶俐, 白帆, 李晓艳, 格根宝乐日, 刘双翼, 王根云, 赵世华. 1株羊源溶血性曼氏杆菌的分离鉴定、药敏试验及致病性研究[J]. 畜牧与饲料科学, 2022, 43(5): 123-128.
[15]	石青青, 孙珊珊, 李丽琴, 宋秀梅, 于海超, 程雪娇, 王建. 重组牛粒细胞集落刺激因子的纯化鉴定及对小鼠的安全性评价[J]. 畜牧与饲料科学, 2022, 43(3): 8-15.