基于响应面法的蟹味菇原生质体制备与再生条件优化

doi:10.12190/j.issn.2096-1197.2021.01.15

北方农业学报 ›› 2021, Vol. 49 ›› Issue (1): 104-110.doi: 10.12190/j.issn.2096-1197.2021.01.15

基于响应面法的蟹味菇原生质体制备与再生条件优化

冯婷婷¹, 宋天磊¹, 春霞¹, 刘超雄¹, 李亚娇², 慕宗杰², 孙国琴², 于传宗², 王海燕², 郭九峰¹

1.内蒙古大学物理科学与技术学院,内蒙古呼和浩特 010021;
2.内蒙古自治区农牧业科学院,内蒙古呼和浩特 010031

收稿日期:2020-11-01 出版日期:2021-02-20 发布日期:2021-03-23
通讯作者: 李亚娇（1990—）,女,助理研究员,硕士,主要从事内蒙古食用菌种质资源收集与创新研究工作。
作者简介:冯婷婷（1997—）,女,硕士研究生,研究方向为生物物理学。
基金资助:
内蒙古自治区研究生教育创新计划资助项目（11200-12110201）; 内蒙古农牧业科学院青年创新基金（2020QNJJNO3）; 内蒙古草原英才滚动支持项目（2019CXJJN09-1）

Optimization of protoplast preparation and regeneration conditions of Hypsizygus marmoreus based on response surface method

FENG Tingting¹, SONG Tianlei¹, Chunxia¹, LIU Chaoxiong¹, LI Yajiao², MU Zongjie², SUN Guoqin², YU Chuanzong², WANG Haiyan², GUO Jiufeng¹

1. College of Physical Science and Technology,Inner Mongolia University,Hohhot 010021,China;
2. Inner Mongolia Academy of Agricultural and Animal Husbandry Sciences,Hohhot 010031,China

Received:2020-11-01 Online:2021-02-20 Published:2021-03-23

摘要/Abstract

摘要： 【目的】为蟹味菇体细胞诱变、融合、基因编辑等研究提供参考。【方法】采取单因素试验和响应面法,对影响蟹味菇原生质体的制备及再生条件的主要因素——菌龄、渗透压稳定剂种类、溶壁酶浓度和酶解时间进行筛选与优化。【结果】单因素试验表明,原生质体最佳制备条件为菌龄7 d,渗透压稳定剂为0.6 mol/L甘露醇,溶壁酶浓度为2%,酶解5 h;最佳再生条件为菌龄6 d,渗透压稳定剂为0.6 mol/L甘露醇,溶壁酶浓度为2%,酶解3 h。响应面法表明,0.6 mol/L甘露醇为渗透压稳定剂时,最佳制备与最佳再生条件为菌龄7 d,溶壁酶浓度为2%,酶解4 h,与模型预测值有良好的拟合性。【结论】基于响应面法确定的最佳制备条件可获得较高的原生质体产量和再生率。

关键词: 蟹味菇, 原生质体, 产量, 再生率, 单因素试验, 响应面法

Abstract: 【Objective】 To provide reference for the studies on cell mutagenesis,fusion and gene editing of Hypsizygus marmoreus.【Methods】 The single factor test and response surface method were used to screen and optimize the main factors affecting the preparation and regeneration conditions of the protoplasts of Hypsizygus marmoreus—bacterial age,osmotic pressure stabilizer types,lysozyme concentration and enzymolysis time.【Results】 The single factor test results showed that the optimal preparation condition of protoplasts were 7 days of bacterial age,with the concentration of 0.6 mol/L mannitol as osmotic pressure stabilizer,the lysozyme concentration of 2%,enzymolysis for 5 h. The optimal regeneration conditions of protoplasts were 6 days of bacterial age,with the concentration of 0.6 mol/L mannitol as osmotic pressure stabilizer,the lysozyme concentration of 2%,enzymolysis for 3 h. The response surface method showed that when 0.6 mol/L mannitol was used as the osmotic pressure stabilizer,the best preparation and regeneration conditions were 7 days of bacterial age,2% of lysozyme concentration,and 4 h of enzymolysis,which had good fitting with the predicted value of the model.【Conclusion】 Based on the optimal preparation conditions determined by response surface method,higher protoplast yield and regeneration rate could be obtained.

Key words: Hypsizygus marmoreus, Protoplast, Yield, Regeneration rate, Single factor test, Response surface method

中图分类号:

S646

冯婷婷, 宋天磊, 春霞, 刘超雄, 李亚娇, 慕宗杰, 孙国琴, 于传宗, 王海燕, 郭九峰. 基于响应面法的蟹味菇原生质体制备与再生条件优化[J]. 北方农业学报, 2021, 49(1): 104-110.

FENG Tingting, SONG Tianlei, Chunxia, LIU Chaoxiong, LI Yajiao, MU Zongjie, SUN Guoqin, YU Chuanzong, WANG Haiyan, GUO Jiufeng. Optimization of protoplast preparation and regeneration conditions of Hypsizygus marmoreus based on response surface method[J]. Journal of Northern Agriculture, 2021, 49(1): 104-110.

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基于响应面法的蟹味菇原生质体制备与再生条件优化

Optimization of protoplast preparation and regeneration conditions of Hypsizygus marmoreus based on response surface method

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